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技术服务

Edman蛋白测序服务

发布日期:2013-11-1 14:18:00,浏览次数:0

Edman降解法蛋白测序现在已经成为现代分子生物学实验中一个非常重要的实验工具。一个循环由一个完整的化学降解过程和即时的HPLC分析组成,一个循环可测定一个氨基酸。

1 样品制备
(1) PVDF膜结合的样品(请提供整膜);
(2) HPLC纯化后的冻干粉样品。

2 样品建议
(1) 样品不能含有下列会干扰蛋白测序的物质: 去污剂(Detergents)/ 盐分(Salts)/ 非挥发性缓冲液(Non volatile buffers) / 胺(Amines)/氨基酸(Amino acids);
(2) 表面吸附往往会导致样品的回收率较低,需要避免因吸附而导致样品丢失,下面有一些小窍门有助于解决这个问题:
  1) 避免透析;
  2) 不要让样品干透;
  3) 用尽可能小的管;
  4) 特殊的疏水性蛋白最多可加SDS至0.05 %以减少吸附损失。
(3) 在SDS-PAGE 电泳纯化蛋白时,注意下面一些事项:
  1) 每三至四周配置一次丙烯酰胺储液;
  2) 聚合过夜使胶聚合充分;
  3) 用尽可能薄的胶来分离
(4) 上样之前预电泳数分钟,充分上样;
(5)  使每条带能有1-5 ug的目的蛋白。

3 客户提供样品的信息:
(1) 至少提供20pmol的量,最好提供50-100pmol,以便我们有足够的量进行重复测序;
(2) 最少达到75%的纯度(基于摩尔数);
(3) 不能含有任何非挥发性的缓冲液,避免氨基酸污染(Tris-glycine缓冲体系不合适 );
(4) 客户期望测得的氨基酸个数 / 分子量 / 组织来源 / 制备方法等。



 

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