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技术服务

甲基化分析服务

发布日期:2013-11-1 14:13:51,浏览次数:0

DNA甲基化研究是表观遗传学的重要内容,真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰的方式在脊椎动物的胚胎发育过程中起着重要的调控作用,参与多种疾病包括各种肿瘤的发病机理,是目前表观遗传学研究的热点。

实验方法
1.甲基化特异性的PCR法(Methylation-specific PCR,MSP)
  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;设计针对某一待测位点的甲基化和非甲基化引物进行PCR扩增,通过电泳检测MSP扩增产物判定待测样本是否存在甲基化位点。
2.亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。针对要调查的区域设计BSP引物进行PCR扩增,对扩增产物进行测序就可以判断哪些CpG位点发生了甲基化;一般将PCR产物克隆后进行测序成功率会比较高。

客户方提供
(1) 要调查的基因名称
(2) 要调查的甲基化区域或位点
(3) 临床科研样本,保证样本质量(详见服务申请单)

送样要求
·细胞(≥10^5个)                                   ·组织(≥100mg,黄豆大小)
·全血(≥0.5ml)                                   ·基因组DNA(≥5ug)

服务内容
(1) 甲基化扩增引物设计合成调试
(2) 样品基因组DNA抽提
(3) 亚硫酸氢盐处理
(4) 扩增、克隆、测序

检测周期
常规检测任务3-4周内完成,具体根据样本量和检测的基因数而定。

我们提交的结果
提供操作流程、电泳图谱、测序图谱、初步分析数据等。(甲基化报告示例)

 

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